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鑒定抗血清質(zhì)量的參數(shù)

點擊次數(shù):1858 更新時間:2016-02-26

抗血清的制備原理:

    抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。

抗血清的質(zhì)量直接影響分析方法的特異性和靈敏度。用于鑒定抗血清質(zhì)量的參數(shù)主要有幾項:

1.親和性(affinity)是指抗體分子上一個抗原結(jié)合部位與相應(yīng)的抗原決定簇之間的結(jié)合強度,常用親和常數(shù)Ka表示。Ka是正/逆向反應(yīng)速度常數(shù)的比值,單位為稀釋度單位(L/mol或LM-1),表示需將lmol抗體稀釋至多少升,才能使抗原—抗體結(jié)合下降50%;而Ka的倒數(shù)為解離常數(shù)(Kd),其單位為濃度單位(mol/L)。為提高放射免疫分析的靈敏度、精密度和準確度,需選用Ka值高(109一1012L/mo1)的抗血清。

2.特異性(specificity)是指一種抗體識別相應(yīng)抗原決定簇的能力。由于一種抗原常有結(jié)構(gòu)極相似的類似物(同類物、前體、降解物和代謝物),其抗血清可能對該抗原的類似物產(chǎn)生交叉反應(yīng)。因此,抗體的特異性通常以交叉反應(yīng)率表示:將反應(yīng)的zui大結(jié)合率抑制下降50%時特異性抗原與類似物的劑量(ED50)之比來計算交叉反應(yīng)率。如胰島素標準品使125I胰島素與抗血清的zui大結(jié)合下降50%的用量為0.5ng,而類似的物(前體)胰島素原的用量為500ng,則相應(yīng)的交叉反應(yīng)率(%)為:0.5/500=0.1%。

    抗體交叉反應(yīng)程度的高低直接影響測定結(jié)果的準確性,但應(yīng)注意,抗血清特異性與分析方法特異性并不*相同,因后者對某一待測抗原的特異性程度不僅取決于所用抗體,尚有賴于標記物的質(zhì)量和方法學(xué)設(shè)計。

3.效價(titer)是反映抗血清中有效抗體含量的相對參數(shù),即抗血清稀釋至能與抗原發(fā)生有效反應(yīng)的zui大稀釋度。通常是將一株抗血清作系列稀釋后與標記抗原反應(yīng),計算不同稀釋度時抗體結(jié)合標記抗原的百分率,繪制出抗體稀釋度曲線。結(jié)合具體方法設(shè)計要求。效價一般指結(jié)合50%標記抗原時,抗血清的稀釋度。

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