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技術(shù)文章   Article首頁>>技術(shù)文章>>相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測ELISA試劑盒檢測原理:

相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測ELISA試劑盒檢測原理:

點(diǎn)擊次數(shù):2240 更新時(shí)間:2019-05-08

相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測ELISA試劑盒檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法:抗相關(guān)蛋白1(FGL1)單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)會(huì)與單抗結(jié)合,游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體,抗相關(guān)蛋白1(FGL1)抗體與結(jié)合在單抗上的相關(guān)蛋白1(FGL1)結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應(yīng)孔中有纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1),辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450nm處測OD值,纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)濃度。

相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測試劑盒樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。

2. 血漿:抗凝劑使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)

影響測量結(jié)果),稱重后將碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測

6. 樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。

試驗(yàn)所需自備物品:

1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)

2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙

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